|
|
Переваримость сухого вещества in vitroВозможности использования показателя переваримости в селекции многолетних трав существенно расширились после введения в лабораторную практику метода in vitro, основанного на определении степени переваривания корма с помощью ферментов пепсина, целлокандина или других ферментов аналогичного действия. Этот метод не требует больших затрат, дает возможность быстро определить переваримость сухого вещества в небольших пробах. Для анализа берут пробы, высушенные в сушильном шкафу при температуре + 65 оС до воздушно-сухого состояния и измельченные на частицы размером 1 мм. Из проб берут навески по 0,5–0,6 г в трех–четырех повторностях, помещают в стеклянные центрифужные пробирки емкостью 60–100 мл и хранят до начала опыта при температуре + 38 ºС. В пробирки автоматической пипеткой добавляют по 50 мл 0,2%-ного раствора пепсина в соляной кислоте (2 г сухого медицинского препарата пепсина на 1 л 0,1%-ной НСl). Закрывают пробками и выдерживают в термостате 24 часа при температуре + 38–40 ºС. Периодически (не менее трех раз в сутки) содержимое пробирки перемешивают вручную так, чтобы частицы корма не оставались на стенках пробирок. Затем центрифугируют в течение 5 мин при 2500 об/мин, подосадочную жидкость удаляют водоструйным насосом и фильтровальной трубкой. К остатку в пробирках приливают 50 мл раствора целлюлозы — 5 г целлокандина в 1 л цитрат-фосфатного буфера с рН 4,6 и помещают в термостат на 48 часов при + 38–40 ºС. Периодически содержимое пробирок перемешивают вручную. Надосадочную жидкость удаляют водоструйным насосом, остаток промывают 50 мл дистиллированной воды, центрифугируют и снова отсасывают надосадочную жидкость. Пробирки с остатком помещают в сушильный шкаф, высушивают при + 105 ºС до постоянной массы и после охлаждения в эксикаторе взвешивают с погрешностью до 0,001 г. За окончательный результат принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допустимое расхождение не должно превышать 3 %. Кроме того в лабораторные определения желательно включать контрольный образец корма с известной переваримостью сухого вещества, определенной непосредственно на животных. Это позволяет вносить коэффициент поправки и сравнивать данные, полученные в разное время.
|
Лаборатория молекулярно-генетических исследований кормовых культур Взаимодействие:
|
